抗原或抗體的測(cè)定在固相載體上進(jìn)行，利用酶標(biāo)女高生成抗原或抗體。

基本方法有：直接法、間接法、雙抗體夾心法和抗原競(jìng)爭(zhēng)法。

1. 直接ELISA

原理：將抗原連接到固相載體上，通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的抗原和雜質(zhì)。添加酶標(biāo)抗體進(jìn)行孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底清洗未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相上攜帶的酶量與樣品中待測(cè)抗原的量有關(guān)。添加底物反應(yīng)。直接法主要用于抗原的測(cè)定。

優(yōu)點(diǎn)：操作流程短，實(shí)驗(yàn)步驟少；無(wú)需使用二抗，避免交叉反應(yīng)；更少的實(shí)驗(yàn)步驟，更不容易出錯(cuò)的操作。

缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)中的一抗需要直接用酶標(biāo)記，成本相對(duì)較高。

2.間接法ELISA

原理：抗原與固相載體連接形成固相抗原。洗滌以去除未結(jié)合的抗原和雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原結(jié)合形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌后加入酶標(biāo)二抗。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合，從而間接標(biāo)記酶。洗滌后加入底物顯色。

優(yōu)點(diǎn)：酶標(biāo)二抗可以加強(qiáng)信號(hào)，提高靈敏度；靈活性更大，同一種酶標(biāo)二抗可以適用于多種不同的一抗；一抗沒(méi)有直接標(biāo)記，可以保留更多的免疫反應(yīng)性；成本較低，使用較少的標(biāo)記抗體。

缺點(diǎn)：增加交叉反應(yīng)的機(jī)會(huì)。

3. 雙抗體夾心ELISA

原理：雙抗體夾心法適用于二價(jià)或二價(jià)以上大分子的測(cè)定，不適用于小分子抗原。將特異性抗體（捕獲抗體）連接到固相載體上，形成固相抗體。洗滌以去除未結(jié)合的抗體和雜質(zhì)。添加待測(cè)樣品并孵育。樣品中的特異性抗原與固相抗體結(jié)合形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌以去除其他未結(jié)合的物質(zhì)。添加酶標(biāo)抗體（檢測(cè)抗體）并孵育。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底清洗未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。添加底物反應(yīng)。

雙抗原夾心法檢測(cè)抗體的反應(yīng)模式與檢測(cè)抗原相似。特異性抗原用于包被并制備酶結(jié)合物以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。

優(yōu)點(diǎn)：特異性高，使用的捕獲抗體和檢測(cè)抗體具有檢測(cè)特異性；適用于復(fù)雜樣品，抗原無(wú)需純化即可用于檢測(cè)；更大的靈活性，更高的靈敏度，直接法或使用間接法。

缺點(diǎn)：檢測(cè)物質(zhì)需要有兩個(gè)以上不同的抗原表位或多個(gè)相同的重復(fù)表位；不適用于小分子物質(zhì)的檢測(cè)。

4. 競(jìng)爭(zhēng)性ELISA

原理：競(jìng)爭(zhēng)性ELISA是最復(fù)雜的方法，通常用于檢測(cè)小分子，如半抗原、激素、藥物等。樣品中待測(cè)游離抗原與固定在固相載體上的抗原競(jìng)爭(zhēng)相同?？贵w數(shù)量有限。當(dāng)樣品中游離抗原較多時(shí)，可結(jié)合的抗體較多，而固相抗原只能結(jié)合較少的抗體。反之亦然。洗滌后去除樣品中的抗原抗體偶聯(lián)物，只留下固相抗原抗體偶聯(lián)物。顯示計(jì)算出的樣品中的抗原含量。競(jìng)爭(zhēng)方法可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置采用直接法、間接法或夾心法等形式。